重組賴氨酰內肽酶RLys-C
重組賴氨酰內肽酶RLys-C
◆概述
賴氨酰內肽酶最早從土壤細菌無色桿菌Achromobacter lyticus中分離得到，能夠特異性識別與切割肽鏈中Lys羧基端肽鍵，常被用于蛋白測序及Lys-X化合物的酶催化合成。
艾美迪選用Achromobacter lyticus來源的，克服大腸桿菌重組表達技術難題進行制備。本品最適pH 9.0~9.5,等電點為pH 6.9~7.0；最適反應溫度30~37℃，50℃以上穩定性下降。在適宜溫度下，該酶穩定性良好，在4 mol/L尿素或0.2%SDS溶液中30℃孵育6 hr后，生物活性未發生降低。可廣泛用于蛋白組學分析，蛋白、抗體類藥物質量檢測，多肽、蛋白類產品制備工藝中。
◆特性
● 高比活性，高特異性，可消化難以酶切的位點，空間構象復雜或疏水性較強的蛋白（如膜蛋白）同樣適用
● 活性穩定，對尿素、乙腈等變性劑耐受能力強
● 批量化生產，連續批次質量穩定，批間差小
● 高純度，重組表達避免了可能存在的雜酶殘留（e.g. Arg-C，Lys-N等）
◆來源
重組 E. coli 菌株，其克隆有來自的無色桿菌（A. lyticus）的蛋白酶I基因。
◆酶活定義
在0.2 mol/L pH 9.0的Tris-HCl緩沖中，溫度為37±2℃的條件下， 1 min催化底物AC-Lys-PNA生成1 μmol PNA所需的酶量為一個活性單位（AU）。
◆純度
將 rLys-C以DTT 還原處理后， 還原電泳顯示純度＞99%
◆使用方法
本品為凍干粉，使用前先使用超純水或25 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0~8.5溶解。
◆應用實例
RLys-C酶切重組人門冬胰島素原（Pro-Insulin-Aspart）
底物Pro-Insulin-Aspart分子量約為7 kDa，含有3個賴氨酸（K），采用 Lys-C 酶切的理論肽段示意圖如下：
酶切條件：酶與底物的質量比為 1：10000，在50 mM Tris-HCl，pH 8.5中37℃酶切16 小時。
峰 A：酶切前肽段 Pro-Insulin-Aspart
峰 B：酶切后 B鏈+C肽+A鏈（去引導肽）
峰 C：酶切后B鏈+A鏈（去引導肽和C肽）
|
名稱
|
RT
|
Area
|
Area%
|
質譜量
|
酶切位點
|
對應肽段
|
|
Pro-Insulin-Aspart
未酶切對照 |
10.45
|
155.045
|
100%
|
7096.94
|
/
|
酶切前
|
|
以IMD-RLys-C-酶切產物
（酶：底物1：10000） |
11.57
|
201.6
|
100%
|
5724.54
|
①
②
③
|
B鏈+A鏈
|
|
以其他公司重組Lys-C酶產物
（酶：底物1：10000） |
10.49
|
146.9
|
61.78%
|
7096.94
|
/
|
酶切前
|
|
10.62
|
81.5
|
34.29%
|
6006.84
|
①
|
B鏈+C肽+A鏈
|
艾美迪的 RLys-C 酶切產物為切除引導肽和 C 肽的門冬胰島素前體，酶切位點①②③均酶切完全。
而其他公司產品僅部分切開酶切位點①，切除效率僅為34.29%，酶切位點②③均未被酶切，未能得到序列正確的門冬胰島素前體。
◆與其他公司產品對比
|
底物
|
酶切位點對比
|
艾美迪
|
其他公司重組Lys-C
|
|
重組人門冬胰島素原
（Pro-Insulin Aspart）
分子量約為7 kDa，含有3個K
|
①PK↓
|
++
|
+
|
|
②DK↓
|
++
|
-
|
|
|
③GK↓
|
++
|
-
|
|
|
重組人普通胰島素原
（Pro-Insulin）
分子量約為7 kDa，含有3個K
|
①PK↓
|
++
|
+
|
|
②PK↓
|
++
|
+
|
|
|
②AK↓
|
++
|
+
|
|
|
PJ-10S小肽
分子量約為1 kDa，含有3個K |
①DK↓
|
++
|
+
|
相同底物濃度的酶切條件下艾美迪的 RLys-C 的酶切效率顯著高于其他品牌同類產品。以生成的肽段 YDDDDK 計算，艾美迪的RLys-C 的酶切率比其他品牌同類產品高約9倍；以生成的肽段 RGWK 計算，艾美迪的RLys-C的酶切效率比其他品牌同類產品高約8.6倍。
◆產品信息
| 產品編號 | 產品名稱 | 規格 |
| RLYS-C0401 |
RLys-C
重組賴氨酰內肽酶
|
20 μg |
| RLYS-C0403 |
RLys-C
重組賴氨酰內肽酶
|
1 mg |
◆相關產品
| 產品編號 | 產品名稱 | 規格 |
| RME0101 |
Lys-C + Trypsin
重組賴氨酰內肽酶/重組胰蛋白酶混合裝
|
20 μg |
| RME0102 |
Lys-C + Trypsin
重組賴氨酰內肽酶/重組胰蛋白酶混合裝
|
20 μg×5 |
| 產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 儲存條件 | 其他 |
| IRLys-C0401 | immobilized RLys-C 固定化重組賴氨酰內肽酶 |
1.0 mL | -15℃以下 | 1.0 mL含1.0 mg |
| MDRK0401 | RLys-C ELISA Kit 重組賴氨酰內肽酶檢測試劑盒 |
96孔 | -15℃以下 |
檢測范圍：
1.0～4000 ng/mL
|
※ 本頁面產品僅供研究用，研究以外不可使用。
 |
 |
 |
| 官網：www.baichuan365.com | 微信服務號：iseebio | 微博：seebiobiotech |
 |
 |
 |
| 商城：mall.seebio.cn | 微信訂閱號：seebiotech | 泉養堂：www.canmedo.com |
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