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來源：Seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發表時間：2012-01-12 13:56:00【大中小】

糖化血紅蛋白(HbA1c)是目前糖尿病(DM)實驗診斷方法中常用的血糖監控指標, 它主要反映患者近2～3個月血糖控制的總體水平，自上世紀70年代以來已廣泛的應用于DM診療的各個方面。糖化血紅蛋白的臨床實驗室檢測方法則已從初期的電泳法、色譜法等發展到如今的免疫比濁法、化學發光法和酶法。近兩年應用酶法測定糖化血紅蛋白在各實驗室相繼展開，直接酶法具有良好精密度及準確度，不易受其他因素干擾，結果準確可靠，方法簡便易行。

檢測原理：特殊蛋白酶分解血紅蛋白（Hemoglobin, Hb），3-5分鐘內果糖基氨基酸從Hb分離，后經果糖基氨基酸氧化酶(Fructosaminase, FAOD)產生H₂O₂，H₂O₂與POD與色原N-(羧甲基氨羰基)-4，4'-二甲氨基二苯胺鈉鹽(DA-64)反應，在751nm測吸光度改變。

2、CNP-NAG 應用于腎損傷早期檢測

N-乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG-ase）在尿中活性的測定，在臨床上應用已有20多年的歷史。實踐證明，它是能早期發現腎臟損害的尿酶。尿中此酶主要來自腎近曲小管上皮細胞，分子量約130-140kd，尿中NAG-ase活性升高，除前列腺炎和精液混入外，是各種腎實質早期損傷的敏感標志物。參閱20多年來中外文獻，測定NAG-ase可以提供許多重要的臨床信息。

NAG(EC3.2.1.30)是一種溶酶體酶，廣泛分布于人體各組織中，但在前列腺和腎臟近端腎小管中含量高。NAG分子量約為130-140kd，在正常情況下，血清中NAG不能通過腎小球濾過從尿中排泄。尿中NAG活性升高，除前列腺炎和精液混入外，常是腎臟損害的標志。尿液NAG總活性及其同工酶是目前臨床上常用的測定指標。

檢測原理：樣品中的NAG作用于底物2-氯-4-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷(CNP-NAG)，水解游離出CNP，其生成速度與樣品中酶活性在一定范圍內成正比，可在400-405nm測定每分鐘吸光度的變化（△A/分），計算NAG的活性。由于色團的pKa為5.5，與NAG-ase的較適反應pH4.8接近，可在反應條件下直接顯色，無需再行堿化，具備了速率法測定的條件。
（1）、性質穩定，干粉可長期保存，制成工作液，條件合適也可穩定至少一周
（2）、操作簡單、省時，無需逐個測樣品空白，也不必堿化呈色
（3）、有足夠的靈敏度，可支持臨床檢出其相應的目標物。
（4）、有較高的準確性和精密度。

3、CNP-AFU和M-G-CNP-AFU應用于原發性肝癌檢測

原發性肝癌（PHC）是我國常見的惡性腫瘤之一，是一種惡性程度高、進展快、預后差、侵襲性強的惡性腫瘤，其死亡率在消化系統惡性腫瘤中列第3位，僅次于胃癌和食管癌。早診斷、早治，是延長生存期、降低死亡率的關鍵。甲胎蛋白（AFP）是診斷PHC的重要指標，但30%～40%的PHC患者AFP陰性，因此尋找更特異、敏感的腫瘤標志物和診斷方法是研究肝癌的重要課題。

α-L-巖藻糖苷酶(α-L-Fucosidase, AFU)是一種溶酶體酸性水解酶，存在于人體肝、胰、腦、肺、腎纖維細胞等溶酶體內，以肝腎含量高，它主要水解含有巖藻糖的脂質，粘蛋白及粘多糖. 正常組織糖苷酶的釋放率變化很小(孕婦除外)，從而使血清糖苷酶維持在一定范圍內. 血清AFU水平測定以往主要用于該酶缺陷引起的巖藻糖酶缺陷病. 近年來發現肝癌患者血清AFU水平有別于其他肝膽疾病，呈顯著性升高，在動物實驗中觀察到morris鼠肝癌組織中AFU活力較正常肝臟高7倍，可作為一項肝癌非特異性標志物用于本病的診斷，其陽性率為73.9%～81%，特異性為90%. 在AFU陽性與陰性肝癌患者中，AFU陽性率之間無明顯差異。

檢測原理：2-氯-4-硝基苯基-α-L-巖藻糖苷（2-Chloro-4-nitrophenyl-Alpha-L- Fucopyranoside, CNP-AFU）被樣本中的α-L-巖藻糖苷酶作用水解產生2-氯-4-硝基苯（CNP）, 或者MG-2-氯-對硝基苯酚-α-L-巖藻糖苷(M-G-CNP-AFU)被樣本中的α-L-巖藻糖苷酶的作用，水解產生MG和 CNP。測定CNP的吸光度的增加量即可以得到AFU的活性。

CNP-α-L-Fucoside＋H2O →CNP＋α-L-巖藻糖

或MG-CNP-α-L-Fucoside＋H2O →M＋G＋CNP＋α-L-巖藻糖

4、GPDA檢測

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶（Glycyl Proline Dipeptidyl Aminopeptidase.GPDA）廣泛分布于人的腎臟、結締組織、唾液腺、淋巴結等組織和人的血清、唾液中。主要功能為分解來自膠原的多肽，對維護結締組織和上皮細胞的結構與功能具有重要價值。

自從七十年代，血清GPDA測定被應用于臨床以來，GPDA的臨床價值得到了深入的研究和廣泛的臨床應用。臨床上主要應用在胃癌的輔助診斷、胃癌是否產生肝轉移的鑒別;同時在原發性肝癌、繼發性肝癌中臨床價值得到了廣泛的應用[1-3]。隨著GPDA的廣泛使用，在其他疾病，例在乳腺癌、腎早期損害、類風濕病等等疾病中的研究得到長足的發展。

檢測原理：在堿性條件下，GPDA催化底物甘氨酰-脯氨酰-對硝基苯胺對甲苯磺酸鹽（Gly-Pro p-nitroanilide p-toluenesulfonate salt, H-Gly-Pro-Pna）水解，生成甘氨酰脯氨酸和黃色的對硝基苯胺，后者可引起在特定波長下吸光度的升高，吸光度升高速率與GPDA活性成正比。

5、亮氨酸氨基肽酶測定

亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase, LAP)是一種蛋白分解酶, 能水解肽鏈N端并由亮氨酸與其他氨基酸形成肽鍵的酶, 廣泛分布于肝、胰、腎等組織中。當人體肝、膽、胰等組織有病變時, 均可出現血清LAP水平升高。測定血清亮氨酸氨基轉肽酶可作為肝病診斷的又一項指標, 對淤膽性肝炎的鑒別診斷、肝道梗阻及胰腺癌的診斷有價值。其肝癌的檢出陽性率較ADA高，比GGT 反映肝臟疾病更加靈敏。亮氨酸氨基肽酶（LAP）的檢測也可早期反映腎損害的性質和程度，并為臨床鑒別腎小球、腎小管損傷提供可能的幫助；其亦可作為妊娠合并ICP及孕婦和胎兒健康情況動態監測的一項有效指標。

檢測原理：采用L-亮氨酸對硝基苯胺鹽酸鹽(L-Leucine-p-nitroanilide, H-Leu-Pna-HCl, CAS16010-98-3)作為底物, 經LAP水解，通過檢測對硝基苯胺(P-nitroaniline)來測定LAP的活性。具有以下優點:速率法、測試速度快、操作簡便、適用于全自動生化分析儀。

6、脯氨酸肽酶(PLD)檢測

血清脯氨酸肽酶(Prolidase，PLD)或脯肽酶，是一種廣泛存在于人體各組織和細胞的亞氨基肽酶，它催化含有C-末端或2肽的水解，對膠原合成和細胞生長過程中的再循環起重要作用。其血中水平變化與肝損害程度及肝病慢性化密切相關。脯氨酸肽酶全稱為亞氨基2肽酶，是由兩個相同的亞單位組成的二聚體，其分子量為97kD。每個亞單位由492氨基酸組成，富含。人PLD基因位于19號染色體短臂上。整個基因長達140Kb以上，包括14個內含子和 15個外顯子。內含子長度從1.0～50Kb，占全部基因的98.60%；外顯子長度從45～5286p，共約1.9Kb，僅占全部基因的1.4%。人 PLD表達從5＇末端開始，開放讀碼框架1.47bp，編碼493氨基酸。起始為蛋氨酰基，它隨后脫落，位于第2位的基因此封閉成為N-末端的最終氨基酸，故其原單位僅剩492個氨基酸。

檢測原理：PLD活性的測定方法較多．其中比較有實用價值的測定方法是分光光度比色法，其基本原理是以甘氨酰一L一脯氨酸為底物在脯氨酸肽酶的作用下釋放出脯氨酸：然后通過脯氨酸與茚三酮反應生成紫紅色化合物來測定所釋放出的脯氨酸量，以產物脯氨酸的量來反映PLD的活性。

7、血管緊張素轉化酶活性的測定

血管緊張素轉化酶(Angiotensin-converting enzyme, ACE)是一種結合糖蛋白，含有鋅元素，屬二肽羧肽酶。可使血管緊張素I形成具有升血作用的血管緊張素II，后者使血管進一步收縮、血壓升高。血管緊張素轉化酶也可使具有降壓作用的舒緩激肽滅活，還可能直接作用于腎上腺皮質促進醛固酮的分泌。是腎素-醛固酮系統及緩激肽系統的重要調節因素。血清血管緊張素 I轉化酶活性的測定常用于結節病的診斷和活動性診斷。

檢測原理：底物N-[3-(2-呋喃基)丙烯酰]-L-苯丙氨酰-甘氨酰-甘氨酸(N-[3-(2-Furyl)acryloyl]-L- phenylalanyl-glycyl -glycine, FAPGG)最大吸收峰在340nm。血管緊張素轉化酶酶解FAPGG生產FAP及GG，從而發生在340 nm處吸光度的下降變化，可進行連續監測法。通過測定FAPGG在340nm處吸光度下降的速度可計算出血管緊張素轉換酶的活性。

FAPGG ACE FAP + GG

8、胱抑素C水平測定

胱抑素C，也稱半胱氨酸蛋白酶抑制劑C( Cystatin C)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑，也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中, 是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質，分子量為13.3KD，由122個氨基酸殘基組成, 可由機體所有有核細胞產生，產生率恒定。循環中的胱抑素C僅經腎小球濾過而被清除，是一種反映腎小球濾過率變化的內源性標志物,