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PUREfrex(R) 2.0 PUREfrex(R) 酶無細胞蛋白合成試劑盒

來源:作者:人氣:-發表時間:2025-06-06 09:14:00【
PUREfrex® 2.0
PUREfrex® 酶無細胞蛋白合成試劑盒
自2022年12月起,PUREfrex® 試劑盒內的Solution I的原材料已更換
自2023年8月起,250 µL×5反應用規格已停產,并推出新規格產品“2 mL 反應用”。停產產品將在庫存售罄后停售。
PUREfrex® 2.0 改良了 PUREfrex® 1.0(#PF001-0.25)的反應液成分,保留 PUREfrex® 特點(RNase和LPS 等的污染少)的同時提高了合成效率。適用于需要大量蛋白的實驗,如蛋白的功能評估等。
本產品的改良旨在提高蛋白的合成活性,因此,根據研究內容不同,PUREfrex® 1.0 的實驗結果可能會更理想。PUREfrex® 1.0 和PUREfrex® 2.0 的對比詳情點擊此處查看。
PUREfrex® 2.0 不含分子伴侶,因此根據合成蛋白不同,可能無法形成正確的高階結構,也可能不溶于水。這時,只需在蛋白合成過程中添加分子伴侶即可解決。本試劑盒也提供了DnaK mix(#PF003-0.5)GroE mix(#PF004-0.5)作為添加劑。
PUREfrex® 2.0 含有還原劑GSH,因此可在還原條件下進行蛋白合成反應。合成需要形成二硫鍵(SS鍵:SS-bond或二硫橋:disulfide bridge)的蛋白時,建議添加DsbC Set (#PF005-0.5)PDI Set (#PF006-0.5)
◆產品組成
關于PUREfrex® 2.0 中各Solution具體成分保密。
250 µL反應用
 
產品規格
產品成分
開封后的儲存溫度 *1
Solution Ⅰ
125 μL
氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等
-20℃
Solution Ⅱ
12.5 μL
蛋白(30% 甘油溶液)
-20℃或-80℃*2
Solution Ⅲ
25 μL
核糖體(20 µM)
-80℃ *2
DHFR DNA *3
堿基序列  
10 μL
含大腸桿菌DHFR基因的
PCR 產物(20 ng/μL)
-20℃
2 mL 反應用
 
產品規格
產品成分
開封后的儲存溫度*1
Solution Ⅰ
1,000 μL
氨基酸、NTP、tRNA、酶底物等
-20℃
Solution Ⅱ
100 μL
蛋白(30% 甘油溶液)
-20℃或-80℃ *2
Solution Ⅲ
200 μL
核糖體(20 µM)
-80℃ *2
DHFR DNA *3
堿基序列  
10 μL
含大腸桿菌 DHFR 基因的
PCR產物(20 ng/μL)
-20℃
*1)試劑盒開封前,請在-80℃條件下儲存。
*2)在-80°C條件下儲存使用后的剩余反應溶液時,應在儲存前使用液氮或干冰/乙醇等進行速凍。請根據需求進行分裝,避免反復凍融。
*3)當用作蛋白合成的陽性對照時,請在20 µL合成反應溶液中添加1 µL DHFR DNA。
◆使用方法
使用PUREfrex®2.0 時,可在任意體積的反應液下進行蛋白合成。例如,20 μL時的制備方法如下所示。
1. 將Solution Ⅰ在室溫~37℃下加熱1 min左右至完全融解,隨后置于冰上。
2. 將Solution Ⅱ和Solution Ⅲ置于冰上融解。
3. 將融解的SolutionⅠ,Ⅱ,Ⅲ輕輕渦旋后,離心并收集試管底部的內容物。
4. 請根據以下配比制備反應液。(DNA 添加量為每kbp 0.5-3 ng/ μL)
  RNase-Free Water
  7-X μL
  Solution Ⅰ
  10 μL
  Solution Ⅱ
  1 μL
  Solution Ⅲ
  2 μL
  模板DNA 注1
  X μL
  Total
  20 μL
5.在37°C的加熱塊或水浴中反應 2~6 h,合成蛋白注2
6.合成的蛋白可用于多種用途注3
注意事項
注1) 模板DNA請根據目標蛋白自行制備。關于制備方法,請參閱“關于模板DNA”。
注2) 如果在氣相恒溫槽(如培養用恒溫器)中進行反應,反應液的溫度上升需花費更多的時間,合成量會有所降低
注3) 通過SDS-PAGE確認合成時,請用水稀釋反應液后進行電泳。詳情請點擊“PUREfrex反應液的SDS-PAGE”查看。
◆使用注意事項
PUREfrex® 為研究用試劑,不可用于包含人在內的動物給藥、臨床和診斷等其他用途。此外,請勿用于食品或家庭用途。
使用 PUREfrex® 時,請使用不含RNase的水、試劑和設備。 此外,建議佩戴手套和口罩。
產品列表
產品編號 產品名稱 產品規格
GFK-PF201-0.25-EX PUREfrex® 2.0 250 µL反應用
GFK-PF201-10-EX PUREfrex® 2.0 10 mL反應用
 (5×2 mL) 
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5 x 250 µL
GFK-PF213-10-EX PUREfrex® 2.1  5 x 2 mL
補充劑
產品編號 產品名稱 產品規格
GFK-PFS052-0.5-EX Purefrex EF-P Supplement  500 µL Equivalents
GFK-PFS052-10-EX Purefrex EF-P Supplement  5 x 2 mL Equivalents

 

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