EV-Up(TM)間充質(zhì)干細胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-02-22 15:46:00【大中小】

細胞外囊泡（Extracellular vesicle : EV）是由細胞釋放的脂質(zhì)雙分子層包被的膜囊泡，作為細胞間的通訊工具發(fā)揮作用。外泌體屬于EV的一種，被認為參與多種生物功能的控制，并有望用作疾病生物標記物或治療制劑。在治療制劑的應(yīng)用方面，具有抗炎和抗纖維化作用的間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cell：MSC）來源外泌體備受矚目，其未來的實用性被寄予厚望。對MSC來源外泌體實際應(yīng)用的期望不斷提升，同時外泌體作為治療制劑的生產(chǎn)技術(shù)研發(fā)也在積極進行。

本文將介紹由FUJIFILM Wako自主研發(fā)的無血清培養(yǎng)基，在生產(chǎn)用于治療的MSC來源外泌體方面的實用性。西寶生物科技（上海）股份有限公司是Wako的授權(quán)一級代理，如您對產(chǎn)品感興趣，咨詢訂購熱線：400-021-8158

EV-Up^™外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基，間充質(zhì)干細胞專用

無血清無動物源成分

EV-Up^™間充質(zhì)干細胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基是一種間充質(zhì)干細胞（MSC）專用的外泌體（EVs）生產(chǎn)培養(yǎng)基。只要將EV-Up^™間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無動物源成分添加至EV-Up^™間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動物源成分中配成完全培養(yǎng)基即可使用。本品不含血清及動物源成分，適用于多種組織來源的MSCs的培養(yǎng)。

◆ 特點

●　比血清培養(yǎng)基的外泌體分泌量高
●　培養(yǎng)的外泌體活性高
●　維持MSC的高存活率

◆ 適用細胞

適用于多種組織來源的MSC。

細胞種類：骨髓來源的MSC，脂肪來源的MSC，臍帶基質(zhì)來源的MSC等。

◆ 使用方法

*往EV-Up^™間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動物源成分（產(chǎn)品編號：053-09451）中添加了EV-Up^™間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無動物源成分（產(chǎn)品編號：298-84001）即為EV-Up^™完全培養(yǎng)基

6孔板培養(yǎng)

1. 將各種間充質(zhì)干細胞以5×10³的密度來鋪板，然后用增殖培養(yǎng)基（血清培養(yǎng)基或無血清培養(yǎng)基）培養(yǎng)至80-90%匯合。

2. 去除增殖培養(yǎng)基后加入4 mL EV-UP™完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)3-5日。

3. 回收培養(yǎng)上清，2,000×g離心20分鐘，用干凈試管收集離心后的上清液，避免吸入沉淀。

※　可在培養(yǎng)上清中添加1/100的EV-Save™細胞外囊泡吸附抑制劑來抑制試管或吸頭等對EV的吸附。

4. 用MagCapture™外泌體提取試劑盒PS提取培養(yǎng)上清中的外泌體。

◆ 應(yīng)用數(shù)據(jù)

外泌體粒子數(shù)

利用PS親和法^*1從各種培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清液中提取外泌體，使用NanoSight的Nano Tracking Analysis技術(shù)對外泌體的粒子數(shù)進行分析。

*1：在金屬離子的存在下，結(jié)合分子通過磷脂酰絲氨酸（PS）捕獲細胞外囊泡后，再使用螯合劑洗脫的方法。

使用MagCapture^™外泌體提取試劑盒PS時，可以通過本方法進行外泌體提取。

*2：Exosome-Depleted FBS

EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基，在培養(yǎng)MSC時，釋放的外泌體粒子數(shù)是D-MEM+10% EV depleted FBS培養(yǎng)的2.6倍左右。另外，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基與血清培養(yǎng)基相比，可以分泌更多的EV。

抗纖維化活性

用TGFβ刺激培養(yǎng)人胎肺成纖維細胞（TIG3細胞），用PS親和法從不同培養(yǎng)基的培養(yǎng)上清中提取EV，取5×10⁷ particles/mL提取出的EV，用RT-PCR對纖維化標記物（Collagen III，αSMA）的基因表達水平進行定量，以比較抗纖維化活性。

使用EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基的EV，強力抑制了由TGFβ引起的纖維化相關(guān)基因的表達。由此可見，F(xiàn)UJIFILM Wako的EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基能培養(yǎng)出的外泌體活性更高。

細胞存活率

將在血清培養(yǎng)基中擴增培養(yǎng)的人骨髓來源的MSC用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)5天，然后檢測產(chǎn)生外泌體后的細胞存活率。

EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基培養(yǎng)的MSC與D-MEM+10% EV-depleted FBS相比，具有同樣高的細胞存活率。

外泌體標志物蛋白表達

用PS親和法從培養(yǎng)上清液中提取外泌體，并通過ELISA檢測標記蛋白CD9、CD63和CD81的表達。

EV-Up^™ 完全培養(yǎng)基與其他血清培養(yǎng)基相比，不同外泌體標記分子的表達更好。

◆ 產(chǎn)品信息

EV-Up™ MSC專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
053-09451	EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™ 間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動物源成分	for Cell Culture	95 mL
298-84001	EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™ 間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無動物源成分	for Cell Culture	5 mL（100 mL用）

外泌體防吸附&凍結(jié)保護試劑

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
058-09261	EV-Save™ Extracellular Vesicle Blocking Reagent EV-Save™ 細胞外囊泡吸附抑制劑	for Genetic Research	1 mL

外泌體提取和純化試劑

產(chǎn)品貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	包裝
299-77603	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS MagCapture™外泌體提取試劑盒PS	for Genetic Research	2 tests
293-77601	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS MagCapture™外泌體提取試劑盒PS	for Genetic Research	10 tests
290-80301	PS Capture™ Exosome Isolation Resin Kit PS Capture™外泌體提取樹脂試劑盒	for Genetic Research	1 kit （0.5 mL 漿狀）
294-84101	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™外泌體提取試劑盒PS Ver.2	for Genetic Research	2 tests
290-84103		for Genetic Research	10 tests

◆ 參考文獻

1） Colombo, M. et al. : Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 30, 255（2014）.
2） Mathieu, M. et al. : Nat. Cell Biol., 21（1）, 9（2019）.
3） Phinney, D. G. and Pittenger, M. F. : Stem Cells, 35（4）, 851（2017）.
4） Rajendran, R. L. et al. : Sci. Rep., 7（1）, 15560（2017）.
5） Lai, R. C. et al. : Stem Cell Res ., 4（3）, 214（2010）.
6） Nakai, W. et al. : Sci. Rep., 6, 33935（2016）.
7） Ma, Y. et al. : Sci. Rep., 11（1）, 13471（2021）.

◆ 相關(guān)產(chǎn)品

MagCapture^™外泌體提取試劑盒
PS Capture^™外泌體ELISA試劑盒
EV-SAVE^™細胞外囊泡阻斷試劑
EV-Up^™間充質(zhì)干細胞專用外泌體生產(chǎn)用培養(yǎng)基
UniWells^™水平共培養(yǎng)板