血漿凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）- 磁微粒化學(xué)發(fā)光法

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2025-05-12 16:08:00【大中小】

1. 項(xiàng)目背景

凝血酶的生成是凝血途徑的核心，它催化纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白形成血栓。由于它在體內(nèi)的半衰期極短，只有幾秒鐘，因此測(cè)定困難。血漿凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）在纖維蛋白聚合物形成過程中產(chǎn)生，是凝血酶生成后與抗凝血酶1:1結(jié)合形成的復(fù)合物，在血漿的半衰期約3-15分鐘，可間接反映凝血酶的生成量，是凝血系統(tǒng)啟動(dòng)的標(biāo)志，可直接、靈敏地反映凝血系統(tǒng)的活化程度，并進(jìn)一步早期預(yù)測(cè)血栓的形成和再栓的復(fù)發(fā)。同時(shí)，TAT也是抗凝治療的敏感指標(biāo)，TAT水平升高提示凝血酶合成增加、凝血功能亢進(jìn)，機(jī)體處于高凝狀態(tài)。

日本血栓止血學(xué)會(huì)的學(xué)術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)《纖溶優(yōu)勢(shì)型DIC的病態(tài)診斷指南（2006年）》中，將“TAT≥20μg/L且PIC≥10μg/mL”作為診斷必要條件。即使是血小板計(jì)數(shù)＜120×10⁹μg/mL的感染性疾病患者（仍存在血小板消耗性減少），如TAT＜7ng/mL，提示發(fā)生DIC風(fēng)險(xiǎn)較低。TAT對(duì)于感染性疾病患者的DIC趨勢(shì)預(yù)測(cè)，是一種陰性預(yù)測(cè)值較高的標(biāo)志物。下圖是TAT的作用機(jī)制。

2. 性能表現(xiàn)

針對(duì)血漿凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體及1種抗原。具體性能如下（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行更為詳細(xì)的驗(yàn)證）

2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)

組合1：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0965B）標(biāo)記吖啶酯；

線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。

2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)

組合1：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0965C）標(biāo)記堿性磷酸酶（DCE0108L）；

線性范圍：0.4 ng/mL-120 ng/mL；最低檢出限：0.4 ng/mL。

2.3 穩(wěn)定性評(píng)估

2.3.1 磁珠包被抗體穩(wěn)定性

采用磁珠標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0532A）將凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964C）包被羧基磁珠濃縮液稀釋成磁珠工作液，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示：

TAT磁珠工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±10%以內(nèi)（不含S0），表明TAT磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好。

表1 TAT磁珠工作液穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)

序號(hào)	TAT抗原稀釋濃度ng/mL	TAT 磁珠工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異
S0	0	-0.2%
S1	2	-5.4%
S2	6.91	-5.4%
S3	16.88	-10.7%
S4	40.73	-5.2%
S5	70.95	-7.6%
平均變化（不含S0）		-6.9%

2.3.2 堿性磷酸酶標(biāo)記抗體及磁珠包被抗體穩(wěn)定性

采用堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0533A）+5%左右的蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，將凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0965C）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液稀釋成堿性磷酸酶工作液，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示：

堿性磷酸酶工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi)（不含S0），表明TAT堿性磷酸酶工作液熱穩(wěn)定性良好。

表2 TAT堿性磷酸酶工作液穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)

序號(hào)	TAT抗原稀釋濃度ng/mL	TAT 堿性磷酸酶工作液37℃ 熱加速7天與2℃ -8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值均值差異
S0	0	-1.4%
S1	2	-0.9%
S2	6.91	3.2%
S3	16.88	9.3%
S4	40.73	1.7%
S5	70.95	3.3%
平均變化（不含S0）		3.3%

3. 臨床相關(guān)性

3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)

西寶TAT抗體配對(duì)組合1（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 TAT發(fā)光試劑賦值臨床相關(guān)性R²在0.94左右。

西寶TAT抗體配對(duì)組合1（＜120 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 TAT發(fā)光試劑賦值臨床相關(guān)性R²在0.95左右。

3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)

西寶TAT抗體配對(duì)組合2（＜20 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 TAT發(fā)光試劑賦值臨床相關(guān)性R²在0.88左右。

西寶TAT抗體配對(duì)組合2（＜120 ng/mL）的發(fā)光值與希森美康 TAT發(fā)光試劑賦值臨床相關(guān)性R²在0.95左右。

西寶TAT抗體配對(duì)組合2（＜120 ng/mL）的發(fā)光值與廣州萬孚 TAT發(fā)光試劑賦值臨床相關(guān)性R²＞0.95。

4. 測(cè)試方案

4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)抗體配對(duì)組合1

樣本/校準(zhǔn)品:加樣量20ul；

試劑1：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0964B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0965B）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。

4.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)抗體配對(duì)組合2

待測(cè)抗原：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物抗原（貨號(hào)：EDD0797B）

樣本/校準(zhǔn)品:加樣量10ul；

試劑1：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0964C）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào):EKY0965C）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：10ul樣品+50ul試劑1，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2，37℃孵育10min，清洗；

第三步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。

5.產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	推薦配對(duì)
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體	EKY0964B	凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964B）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0965B）標(biāo)記吖啶酯（發(fā)光配對(duì)組合1）
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體	EKY0965B
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體	EKY0964C	凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體3（貨號(hào)：EKY0964C）包被羧基磁珠+凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體4（貨號(hào)：EKY0965C）標(biāo)記堿性磷酸酶（發(fā)光配對(duì)組合2）
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體	EKY0965C
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964B）-羧基磁珠濃縮液	DKY1327A
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0965B）-吖啶酯濃縮液	DKY1327B
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0964C）-羧基磁珠濃縮液	DKY1327C
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物（TAT）抗體（貨號(hào)：EKY0965C）-堿性磷酸酶濃縮液	DKY1327D
凝血酶-抗凝血酶復(fù)合物抗原	EDD0797B
羧基磁性微球，1.5um	DEG0800C
AMPPD 發(fā)光底物液（即用型）	DCD0517B
蛋白保護(hù)劑GH	DCL0009A	推薦使用濃度5%左右
重組堿性磷酸酶（高活性）	DCE0108L
磁珠標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光）	DCD0532A	/
堿性磷酸酶（ALP）標(biāo)記物稀釋液（化學(xué)發(fā)光）	DCD0533A	/