Phos-tag(R) Acrylamide

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2025-05-06 10:55:00【大中小】

Phos-tag™ Acrylamide

用于通過 SDS-PAGE 分離磷酸化蛋白質(zhì)

僅需將Phos-tag^® Acrylamide與丙烯酰胺溶液混合并聚合，即可生成用于分離磷酸化和非磷酸化蛋白質(zhì)的Phos-tag^® SDS-PAGE。

在不使用放射性同位素的情況下，利用 Phos-tag™ SDS-PAGE 即可分離不同條帶中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分離后的凝膠可用于 Western blotting 和質(zhì)譜分析等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

Phos-tag™ SDS-PAGE 操作簡單，只需在常規(guī) SDS-PAGE 膠中加入 Phos-tag™ Acrylamide 和 Mn²⁺或者 Zn²⁺即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在電泳過程中，磷酸化蛋白的磷酸基團(tuán)與 Phos-tag™ 中的二價(jià)金屬離子相結(jié)合，降低其遷移速度，從而可區(qū)分磷酸化與非磷酸化蛋白。

◆優(yōu)點(diǎn)、特色

● 采用 Phos-tag™ SDS-PAGE 可輕松分離磷酸化蛋白

無任何放射性元素及化學(xué)標(biāo)記！

● 不論氨基酸殘基的類型/位點(diǎn)如何，均可使用

可用于未知的磷酸化分析

可用于檢測新的磷酸化位點(diǎn)（無需購買商品化磷酸化抗體、無需特意制備磷酸化抗體）

● 磷酸化位點(diǎn)數(shù)量/位點(diǎn)不同的磷酸形式也可分離

顯示磷酸化程度和磷酸化形式

● 可同時(shí)檢測磷酸化/非磷酸化形式

可定量各種磷酸化形式

可簡單明確有無磷酸化

● 無需RI或特殊的儀器

實(shí)驗(yàn)成本低，操作簡單。（SDS-PAGE的試劑→只要有設(shè)備即可使用）

● 電泳后可用于WB、MS分析，也可用于二維電泳

WB：可分析內(nèi)源性蛋白

MS：可顯示各磷酸化形式的磷酸化位點(diǎn)的組合

二維電泳：可分離相同等電點(diǎn)和分子量的磷酸化形式

適用于內(nèi)源性蛋白的磷酸化分析！

◆Phos-tag^®SDS-PAGE的原理

Phos-tag^® Acrylamide的結(jié)構(gòu)

1. 電泳中的磷酸化蛋白會(huì)被2個(gè)二價(jià)金屬離子捕獲

2. 磷酸化水平越高，電泳速度越慢

3. 根據(jù)磷酸化水平進(jìn)行分離（即使磷酸化位點(diǎn)的數(shù)量相同，只要位置不同也可進(jìn)行分離）

常規(guī)的SDS-PAGE（上圖：非Phos-tag^®條件下）中，無法確認(rèn)底物是否被磷酸化。

◆案例、應(yīng)用

【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比較】

“我推薦使用Phos-tag ™ ——東京大學(xué)研究院醫(yī)學(xué)研究科小川覺之”

Phos-tag ™ 是專為研究磷酸化蛋白而新開發(fā)出來的試劑。此產(chǎn)品使用方便，不但可用于體外實(shí)驗(yàn)，還能定量分析體內(nèi)蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常規(guī)電泳實(shí)驗(yàn)，無需購買特殊設(shè)備，性價(jià)比高。傳統(tǒng)蛋白磷酸化的研究需要特異的磷酸化抗體、RI 等其它試劑，操作復(fù)雜，花費(fèi)大，且放射性元素會(huì)有安全隱患，而 Phos-tag ™ 的出現(xiàn)恰恰可以彌補(bǔ)這些缺點(diǎn)，為磷酸化蛋白研究提供新的方向。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分離效果圖

Lane 1 為非磷酸化蛋白，Lane 2-5 為磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化狀態(tài)不同而條帶遷移率也有所不同。

磷酸化/ 非磷酸化蛋白的數(shù)量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的豐度等都可根據(jù)條帶遷移和條帶濃度求得。

【資料提供】

日本東京大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)系研究科

【二維電泳中的應(yīng)用：分析 hnRNP K 磷酸化異構(gòu)體】

小鼠巨噬細(xì)胞 J774.1 經(jīng) LPS 刺激后，裂解細(xì)胞，經(jīng)過免疫沉淀法分離得到 hnRNP K 。在二維電泳中，一維是IPG 膠，二維是 Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分離 hnRNP K 的異構(gòu)體。利用質(zhì)譜儀，可以確認(rèn)不同的點(diǎn)代表不同的亞型或修飾蛋白。

二維電泳

同一個(gè)等電點(diǎn)的位置上，不同位點(diǎn)發(fā)生磷酸化都可以被區(qū)分開來（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）

【參考文獻(xiàn)】

Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【結(jié)果提供】

橫濱市立大學(xué) 生命納米系統(tǒng)科學(xué)研究科生物體超分子系統(tǒng)科學(xué)專業(yè) 木村彌生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化學(xué)研究所 RCAI 小原收

【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的變化】

常規(guī) SDS-PAGE 和Phos-tag^TM SDS-PAGE 后迚行克疫印跡實(shí)驗(yàn)分析 EGF 刺激的 A431 細(xì)胞中 MAPK 磷酸化水平。

摘自 Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.

【使用示例：α-酪蛋白去磷酸化反應(yīng)隨時(shí)間的變化】

使用Phos-tag^®SDS-PAGE和常規(guī)SDS-PAGE分離堿性磷酸酶隨時(shí)間（孵育時(shí)間：0~120 min）去磷酸化的α-酪蛋白樣品。

◆相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	用　　途
Phos-tag™ Acrylamide	分離: SDS - PAGE 分離不同磷酸化水平的蛋白
SuperSep Phos-tag™	分離: 預(yù)制膠中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
Phos-tag™ Biotin	檢測: 代替 Western Blot 檢測中的磷酸化抗體
Phos-tag™ Agarose	純化: 通用柱層析，純化磷酸化蛋白
Phos-tag™ Mass 　Analytical Kit	分析: 用于質(zhì)譜 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的檢測靈敏度

phos-tag™ 由日本廣島大學(xué)研究生院醫(yī)齒藥學(xué)綜合研究科醫(yī)藥分子功能科學(xué)研究室開發(fā)，對應(yīng)指導(dǎo)手冊請見相關(guān)資料。

產(chǎn)品列表

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品等級(jí)	備注
304-93526	Phos-tag Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液	0.3 mL	蛋白研究	溶液型
300-93523	Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺	2 mg	蛋白研究	粉末型
304-93521	Phos-tag Acrylamide AAL-107 Phos-tag 丙烯酰胺	10 mg	蛋白研究	粉末型

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品等級(jí)
301-93531	Phos-tag™ Biotin BTL-104 Phos-tag™ 生物素	10 mg	-
308-97201	Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution Phos-tag™ 生物素1mM水溶液	0.1 mL	-
387-07321	Phos-tag™ Tip Phos-tag™ 瓊脂糖槍頭	8 pcs	-
192-17401	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%, 13 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，6%，13孔	5 塊	-
199-17391	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%, 17 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，6%，17孔	5 塊	電泳用
193-16691	SuperSepTM Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，15%，13孔	5 塊	電泳用
193-16711	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，10%，13孔	5 塊	電泳用
196-16701	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，15%，17孔	5 塊	電泳用
190-16721	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，10%，17孔	5 塊	電泳用
195-17371	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 13 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，7.5%，13孔	5 塊	電泳用
192-17381	SuperSep™ Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/L，7.5%，17孔	5 塊	電泳用
193-16571	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50 μmol/ L，12.5%，17孔（用于Wako EasySeparator電泳儀）	5 塊	電泳用
195-16391	SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag™ 預(yù)制膠50μmol/L ，12.5%，13孔	5 塊	電泳用
305-93551	Phos-tag™ Mass Analytical Kit Phos-tag™ 質(zhì)譜分析試劑盒	1 Set	電泳用