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SuperSep Phos-tag 丙烯酰胺預(yù)制膠

包裝:5塊
  • 英文名:SuperSep Phos-tag
  • 別名:丙烯酰胺預(yù)制膠
  • 品牌:Wako
SuperSep Phos-tag?丙烯酰胺預(yù)制膠,內(nèi)含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預(yù)制膠中含有鋅作為金屬離子,無(wú)需特異性磷酸化抗體或者同位素標(biāo)記,在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好,結(jié)果條帶清晰。預(yù)制膠打開(kāi)包裝即可直接使用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件,Phos-tag預(yù)制膠有多款丙烯酰胺濃度和孔數(shù)可選,提供專(zhuān)門(mén)適合BioRad和Life Technologies電泳槽尺寸的預(yù)制膠。

*西寶提示:我司所銷(xiāo)售的化學(xué)試劑、原料等所有產(chǎn)品(包括但不限于抗生素類(lèi)、蛋白質(zhì)類(lèi)、試劑盒類(lèi)產(chǎn)品等)僅限用于科學(xué)研究用途,不得作用于人體。

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SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠
SuperSep Phos-tag即丙烯酰胺預(yù)制膠
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠,內(nèi)含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預(yù)制膠中含有鋅作為金屬離子,無(wú)需特異性磷酸化抗體或者同位素標(biāo)記,在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好,結(jié)果條帶清晰。預(yù)制膠打開(kāi)包裝即可直接使用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件,Phos-tag預(yù)制膠有多款丙烯酰胺濃度和孔數(shù)可選,提供專(zhuān)門(mén)適合BioRad和Life Technologies電泳槽尺寸的預(yù)制膠。
Phos-tag磷酸化親和電泳原理
Phos-tag<sup>™</sup>磷酸化親和電泳原理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠產(chǎn)品特點(diǎn):
■ 即開(kāi)即用 - 節(jié)約寶貴的時(shí)間
■ 根據(jù)磷酸化程度分離磷酸化蛋白
■ 分離效果好,條帶清晰
■ 無(wú)需磷酸化特異性抗體和放射性同位素標(biāo)記
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠案例:
(1)分離磷酸化和去磷酸蛋白
分離磷酸化和脫磷酸蛋白
[電泳緩沖液]
Tris-甘氨酸-SDS 緩沖液

[電泳樣品]
條帶1: 未處理白蛋白
條帶2: 去磷酸化白蛋白

[電泳條件] 20 mA, 70分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水

白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化,采用的是堿性磷酸酶(日本基因公司,貨號(hào)319-02661)。條帶遷移證明去磷酸化完成。
(2)去磷酸化過(guò)程
去磷酸化過(guò)程
[電泳緩沖液]
Tris-甘氨酸-SDS 緩沖液

[電泳樣品]
條帶1: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 0 分鐘)
條帶2: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 15 分鐘)
條帶3: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 30 分鐘)
條帶4: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 45 分鐘)
條帶5: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 60 分鐘)

[電泳條件] 35 mA, 60分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水

β-酪蛋白按時(shí)間序列進(jìn)行去磷酸化。結(jié)果證明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分離開(kāi)了。同時(shí)驗(yàn)證去磷酸化程度與時(shí)間相關(guān)。
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠產(chǎn)品列表
1、適用于Bio-Rad電泳槽的預(yù)制膠
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
198-17981
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm
195-17991
5 gels
2、適用于Life-technology電泳槽的預(yù)制膠
Product Name Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
192-18001
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm
199-18011
5 gels
3、適用于wako電泳槽的預(yù)制膠(>90 x 85 x 1 mm)
Product Name Well Wako Cat. No. Pkg. Size
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6%
13 wells
192-17401
5 gels
17 wells
199-17391
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%
13 wells
195-17371
5 gels
17 wells
192-17381
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%
13 wells
193-16711
5 gels
17 wells
190-16721
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%
13 wells
195-16391
5 gels
17 wells
193-16571
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%
13 wells
193-16691
5 gels
17 wells
196-16701
5 gels
SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%
13 wells
197-16851
5 gels
17 wells
194-16861
5 gels
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠使用須知
樣品制備:
Phos-tag SDS-PAGE對(duì)于蛋白樣品中的雜質(zhì)非常敏感,尤其是螯合劑,釩酸,無(wú)機(jī)鹽,表面活性劑這類(lèi)物質(zhì)。
強(qiáng)烈建議在Phos-tag SDS-PAGE之前通過(guò)TCA沉淀或滲析法降低雜質(zhì)含量。

轉(zhuǎn)膜前處理:
另一個(gè)必須的步驟是在轉(zhuǎn)膜前,用EDTA去除凝膠中的金屬離子(Mn2+或者Zn2+); 該步驟可提高蛋白的轉(zhuǎn)膜效率。
  1. 分別準(zhǔn)備10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 兩種1x transfer buffer。
  2. 將凝膠浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,至少20分鐘,溫和搖晃。更換新緩沖液,重復(fù)3次。
  3. 將凝膠浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,10分鐘,溫和搖晃。
  4. 轉(zhuǎn)膜操作*。
* 建議用濕法轉(zhuǎn)膜,以提高轉(zhuǎn)膜效率。
轉(zhuǎn)膜前處理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠質(zhì)量控制
每一批SuperSep Phos-tag™,出廠(chǎng)前均據(jù)產(chǎn)品規(guī)格進(jìn)行測(cè)試,以保證可分離磷酸化和非磷酸化蛋白,且分離程度在正常參數(shù)內(nèi)。
Phos-tag(TM)其它相關(guān)產(chǎn)品
相關(guān)資料
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