Cisbio-HTRF篩選技術(shù)——高通量藥物篩選必備神器

來(lái)源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2019-06-25 12:55:00【大中小】

Cisbio成立于1974年，總部位于法國(guó)Codolet，專為生命科學(xué)和診斷市場(chǎng)開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和銷售高質(zhì)量試劑和試劑盒。與市場(chǎng)上現(xiàn)有的傳統(tǒng)分析方法相比，Cisbio所開(kāi)發(fā)的方法能夠?yàn)槭褂谜咛峁└`敏的定量免疫分析。其中包括各種經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的藥物發(fā)現(xiàn)篩選試劑和高通量分析試劑盒，以及僅用于體外診斷試劑盒。

具體而言，Cisbio的HTRF® 篩選技術(shù)（均相時(shí)間分辨熒光技術(shù)）是快捷方便的檢測(cè)方法。西寶生物課提供Cisbio HTRF®相關(guān)檢測(cè)試劑盒，貨期穩(wěn)定！產(chǎn)品線齊全！咨詢訂購(gòu)熱線：400-021-8158！

HTRF 原理

HTRF技術(shù)基于時(shí)間分辨熒光（TRF）和熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）兩大技術(shù)原理

時(shí)間分辨熒光（TRF）

TRF利用稀土元素中鑭系元素的獨(dú)特性質(zhì),與普通熒光的主要區(qū)別是熒光的持續(xù)時(shí)間不同。普通熒光的半衰期為納秒級(jí)，鑭系元素的半衰期是毫秒級(jí)，有6個(gè)數(shù)量級(jí)的差別。所以，在檢測(cè)時(shí)，TRF有一個(gè)時(shí)間延遲---50微秒。經(jīng)過(guò)這個(gè)時(shí)間延遲，普通熒光的信號(hào)幾乎為零。所以，TRF的背景低，反映樣品的實(shí)際情況。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）

FRET技術(shù)利用了兩種熒光基團(tuán)的能量轉(zhuǎn)移，這兩種熒光基團(tuán)分別稱為能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）。Donor 被外來(lái)光源激發(fā)（例如氙燈或激光），如果它與Acceptor 比較接近，可以將能量共振轉(zhuǎn)移到Acceptor上，使其受到激發(fā)，發(fā)出特定波長(zhǎng)的發(fā)射光。將 Donor 和 Acceptor分別與相互作用的兩個(gè)生物分子結(jié)合，生物分子的結(jié)合可以將 Donor 和 Acceptor 拉到足夠近的距離，產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移。由于Acceptor的發(fā)射光來(lái)自于能量轉(zhuǎn)移，所以在實(shí)驗(yàn)中不需要將未結(jié)合與已結(jié)合的分子分開(kāi)，即不需要洗滌步驟。

HTRF 的優(yōu)勢(shì)：

HTRF 是不需要洗滌的ELISA。其優(yōu)勢(shì)如下：
· 操作簡(jiǎn)單：空板直接加樣，加完即可檢測(cè)，時(shí)間短（加樣和孵育2h）
· 體系穩(wěn)定：7天內(nèi)可隨時(shí)檢測(cè)，信號(hào)基本不變
· 適合珍貴樣本：整個(gè)實(shí)驗(yàn)體系只需20ul
· 均相檢測(cè)體系：無(wú)需包被，免洗ELISA，省時(shí)省力
· 數(shù)據(jù)客觀真實(shí)：比值處理可有效去除背景熒光，假陽(yáng)性率和假陰性率低
· 反映樣品的實(shí)際情況，假陽(yáng)性假陰性率低，可去除由于天熱產(chǎn)物自發(fā)熒光引起的背景

HTRF 的能量供體

HTRF的能量供體是銪（Eu）和鋱（Tb）的穴狀化合物。

在這個(gè)穴狀化合物里，Eu和Tb被永久地嵌合在一個(gè)籠子里，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

這個(gè)結(jié)構(gòu)是由J. M. Lehn's教授發(fā)明的，并由此在1987年獲得了諾貝爾獎(jiǎng)。

穴位化合物結(jié)構(gòu)圖

HTRF 的能量受體

HTRF的能量受體也有兩種，XL665和d2。它們的光學(xué)性質(zhì)相同，分子量不同。前者分子量為105 KD，實(shí)際上就是別藻藍(lán)蛋白（APC）。我們將APC的亞基偶聯(lián)在一起，使其不能解離，提高了穩(wěn)定性。后者分子量為1KD，在某些實(shí)驗(yàn)中有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。

HTRF 的操作步驟：

HTRF的操作步驟簡(jiǎn)單，只需要將實(shí)驗(yàn)所需試劑加進(jìn)去，然后孵育、檢測(cè)即可，如下圖所示。

HTRF 檢測(cè)儀器多樣化：

Cisbio與幾乎所有的儀器供應(yīng)商都建立了合作伙伴關(guān)系，下面是經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的儀器列表。所有這些儀器都標(biāo)有HTRF®的標(biāo)志。

HTRF 的應(yīng)用領(lǐng)域：

應(yīng)用產(chǎn)品列表：

訂購(gòu)咨詢熱線：400-021-8158

	試劑盒	應(yīng)用
激酶(Kinase)	STK	1、絲氨酸、蘇氨酸激酶活性檢測(cè) 2、抑制劑或激動(dòng)劑的篩選
	TK	1、酪氨酸激酶活性檢測(cè) 2、抑制劑或激動(dòng)劑的篩選
	ADP Transcreener	激酶、ATP酶活性檢測(cè)，以及反應(yīng)中生成ADP的定量
G蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR)	cAMP	1、Gs，Gi類受體激動(dòng)劑和拮抗劑的篩選 2、PDE酶活性的檢測(cè) 3、腺苷酸環(huán)化酶活性檢測(cè) 4、受體活性檢測(cè)
	IP-One	1、Gq類受體活性檢測(cè) 2、受體激動(dòng)劑和拮抗劑，別構(gòu)調(diào)節(jié)劑以及反向激動(dòng)劑篩選 3、緩慢激動(dòng)劑的檢測(cè)
	IP-One Elisa	針對(duì)科研用戶推出的傳統(tǒng)的Elisa方法 1、PLC相關(guān)受體的活性檢測(cè) 2、驗(yàn)證GPCR功能
	Tag-lite	1、替代同位素做受體配體結(jié)合試驗(yàn)2、受體的二聚化試驗(yàn) 2、受體的二聚化實(shí)驗(yàn)
磷酸化蛋白	pERK	1、AKT/MAPK通路研究 2、細(xì)胞表面受體研究
磷酸化蛋白	pAKT	1、AKT/MAPK通路研究 2、細(xì)胞表面受體研究
生物標(biāo)記物 (Kinase)	Amyloid beta1-40	1、Amyloid beta1-40 peptide定量 2、分泌酶活性檢測(cè)
	Apo A1	1、載脂蛋白A1定量 2、核受體活性檢測(cè)
	Apo B	1、載脂蛋白B定量 2、核受體活性檢測(cè)
	cGMP	1、cGMP定量 2、PDE酶活性檢測(cè) 3、鳥苷酸環(huán)化酶活性檢測(cè) 4、受體活性檢測(cè)
	Cortisol	1、Cortisol定量 2、11β-HSD1活性檢測(cè)
	Estradiol	l、Estradiol定量 2、17β-HSD1活性檢測(cè)
	Histamine	Histamine定量
	Insulin	Insulin定量
	PEG2	PGE2定量
	Sirt1	Sirt1酶活性檢測(cè)
抗體定量	Total IgG	1、IgG定量 2、帶Fc標(biāo)簽蛋白定量 3、人源化抗體篩選 4、抗體生產(chǎn)時(shí)的質(zhì)控
	Kappa Mab	1、含Kappa輕鏈抗體的定量 2、抗體生產(chǎn)時(shí)的質(zhì)控
	Lamda Mab	1、含Lamda輕鏈抗體的定量 2、抗體生產(chǎn)時(shí)的質(zhì)控

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