抗體稀釋緩沖液選擇及應用

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-11-21 14:20:00【大中小】

抗體稀釋緩沖液是一種用于稀釋抗體的溶液，通常在免疫實驗中使用，如Western Blot、免疫熒光（IF）、免疫組化（IHC）等。抗體稀釋緩沖液的主要作用是防止抗體效價下降，減少非特異性吸附，并提高實驗的特異性和靈敏度。

抗體稀釋緩沖液的配方和成分根據不同的實驗需求有所不同。一些緩沖液中會添加牛血清白蛋白（BSA）作為穩定劑，以防止抗體在稀釋過程中失活。此外，某些緩沖液還可能包含防腐劑如疊氮鈉，以延長稀釋液的保存時間。

主要作用

維持抗體穩定性：提供一個適宜的pH值和離子強度環境，防止抗體變性或失活。

降低非特異性結合：減少抗體與非目標蛋白或基質的結合，提高實驗的特異性。

優化抗體與抗原的結合：通過調節緩沖液的成分，可以影響抗原-抗體反應的效率。

抗體稀釋液產品	說明	應用
抗體稀釋液（普通型）	抗體稀釋液（普通型）（Antibody Dilution Buffer）用于普通抗體的稀釋，可防止抗體效價下降，減少抗體非特異性吸附。稀釋后的抗體在4℃可以短期保存，抗體的效價會隨時間而下降。	按照適當比例稀釋抗體，例如 1:1000，即將1μl抗體加入到1ml稀釋液中。抗體稀釋后可直接用于實驗，在一次孵育結束后，可以回收稀釋的抗體，4℃短期保存，以用于下次的實驗，但抗體的效價會隨時間而降低。
封閉用抗體稀釋液	抗體稀釋液中添加了抗體保護劑，可以保持抗體的活性和穩定性，減少特異性結合，降低非特異性的背景著色，提高實驗的特異性和靈敏度。主要成分由Tris-HCl緩沖液、牛血清白蛋白、疊氮鈉組成。	封閉
通用型免疫測定抗體稀釋液	抗體稀釋液用在所有免疫測定中稀釋抗體。不含免疫球蛋白BSA，不含磷酸鹽、疊氮化鈉或汞防腐劑。可用于稀釋所有抗體，包括過氧化物酶偶聯物和針對磷蛋白的抗體。不適合稀釋針對S100蛋白的抗體。	用于稀釋一抗或二抗。稀釋后的抗體可在2-8℃下保存數周。該通用抗體稀釋緩沖液已被用于血液學及組織學研究的免疫印跡。
免疫組化用抗體稀釋緩沖液	對組織或3D細胞培養物執行免疫組化(IHC)研究。該緩沖液由含0.2%吐溫20、肝素、3%驢血清和5%DMSO的PBS組成。有助于抗體穿透至組織并封閉非特異性信號，有助于在一些組織或3D細胞培養物深度下實現清晰、明亮成像。可快速透明化用于3D成像的熒光標記組織，最大限度地減少組織皺縮、膨脹或其他形態學變化，與大多數熒光基團（包括染料和熒光蛋白）兼容。	抗體稀釋緩沖液用于稀釋一抗或二抗。

抗體稀釋緩沖液的pH值通常為7.0至7.4，這是因為這個范圍內的緩沖液能夠更好地保持抗體的活性和結合特性。此外，緩沖液中的離子強度也會影響抗體的結合效果，因此在選擇稀釋緩沖液時需要考慮這些因素。

在使用抗體稀釋緩沖液時，通常需要根據抗體的效價和實驗的具體要求進行稀釋。一抗的稀釋比例可能從1:100到1:1000不等，稀釋后的抗體可以短期保存在4℃下，但效價會隨時間逐漸降低。

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抗體稀釋緩沖液中pH值和離子強度影響

pH值的影響

pH值對抗體的穩定性有顯著影響。研究表明，當pH值大于6.5或小于8.5時，抗原抗體結合效率會受到嚴重影響。極端的pH值會導致抗體分子變性，破壞抗原識別表位，從而降低抗原抗體的結合效率。

抗體的互補決定區（CDR）在pH 7.4-7.6時形成強結合，但在pH 7時僅形成弱結合。這表明pH值在特定范圍內對抗體的結合能力有顯著影響。天冬氨酸組成的CDR對pH變化敏感，隨著pH值的升高，免疫球蛋白之間的蛋白質-蛋白質相互作用增強。

離子強度的影響

離子強度通過靜電相互作用影響抗體與分析物的結合。當離子強度低于0.005 M PBS時，IC50顯著增加；而當離子強度高于0.01 M PBS時，IC50大幅降低。這表明鹽類會與抗體競爭，通過靜電相互作用與分析物競爭，從而降低分析的可檢測性。

大多數稀釋液含有毫摩爾量的氯化鈉或其他鹽，以減少帶電分子之間的非特異性相互作用。然而，過強的離子強度應避免，因為它可能會克服高親和力抗體-表位結合所需的特定電荷相互作用。

注意事項

抗體稀釋緩沖液通常可在4℃下保存數月，使用前建議過濾以去除顆粒物，同時，針對特定實驗需求，可能需要對緩沖液的配方進行優化以獲得最佳效果。

* 部分內容來自網絡及論文

參考文獻

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