溶酶體細胞毒理檢測試劑盒

來源：作者：人氣：-發(fā)表時間：2023-10-08 09:52:00【大中小】

溶酶體細胞毒理檢測試劑盒

Lyso-ID® Red cytotoxicity kit

◆原理

Lyso-ID^® Red cytotoxicity kit 陽離子兩親性示蹤劑（CAT）的染料，其以類似誘導(dǎo)磷脂藥物的方式迅速分到細胞中。通過在探頭（染料）上放置可滴定基團，形成此示蹤。使標(biāo)記物擴展到用弱堿性細胞穿透物化合物預(yù)處理的細胞層狀包涵體，如抗瘧藥氯喹。此外，溶酶體本身探頭可用于突出溶酶體樣細胞器，前提是其中的細胞產(chǎn)生包含大多數(shù)降解酶的溶酶體，非酸性母體細胞器的空泡可以監(jiān)測溶酶體降解功能的失常，使用藥物類的陽離子示蹤染料選擇性地快速染色酸性細胞器，可用于監(jiān)控活細胞內(nèi)溶酶體的積聚和溶酶體樣結(jié)構(gòu)。可用于體外毒理學(xué)和臨床前藥物安全評估。

◆優(yōu)點·特色

●　包括迅速區(qū)分細胞和標(biāo)記酸性細胞器的獨特藥物類染料的分析。

●　市面上少有可用于長期監(jiān)測細胞毒性作用的商業(yè)化產(chǎn)品。

●　高通量快速檢測：染料僅需10-15分鐘孵育。

●　無需與人工磷脂類似物共同培育進行檢測，消除了混雜染料所造成偽像的可能性。

●　監(jiān)控溶酶體積累長期藥物治療的反應(yīng)。

●　定量分析，包括藥物誘導(dǎo)，3個小時即可完成

◆試劑盒組成

10×雙色檢測試劑：2×1 mL
檢測緩沖液：20 mL

Verapamil 對照：3 μmoles
10×分析緩沖液：15 mL

◆案例·應(yīng)用

1、消除混雜染料所造成偽像

在短短15分鐘，LYSO-ID^® 紅染料培養(yǎng)消除了混雜染料所造成偽像的可能性。在24小時內(nèi)U-2 OS細胞的熒光強度對應(yīng)不同濃度氯喹。在藥物治療期間，把用LipidTox染料（綠線）染色的細胞放在熒光脂質(zhì)中培育24小時。在藥物培育后，用LYSO-ID^® Red dye（red line）或Hoechst公司產(chǎn)品33342（藍線）染色細胞15分鐘。

2、激發(fā)和發(fā)射光譜

A是LYSO-ID^® Red Detection Reagent；B是Hoechst 33342細胞核染色。

3、溶酶體擾動活性治療學(xué)的高通量篩選

使用傳統(tǒng)的熒光酶標(biāo)儀去估測在U-2 OS細胞里維拉帕米的毒性。用維拉帕米處理U-2 OS的細胞18小時后，用LYSO-ID^® Red dye染色15分鐘。高Z因子（0.87為100 μM的維拉帕米）顯示LYSO-ID^® Red dye適合HTS的應(yīng)用。Hoechst可用作復(fù)染劑，歸一化控制細胞數(shù)目。

4、細胞的復(fù)合亮場和熒光顯微鏡圖像

U2-OS細胞（左），用64 μM氯喹預(yù)先處理5小時的細胞（右）。用LYSO-ID^® Red dye來染色細胞10分鐘。用Hoechst 33342 染料進行細胞核復(fù)染。

5、使用LYSO-ID^® Red dye來估測U-2 OS細胞藥物誘導(dǎo)的溶酶體的累積

這兩種化合物是陽離子和兩親性，并且可觀察到誘導(dǎo)溶酶體內(nèi)磷脂異常累積，導(dǎo)致板層體的形成。由圖中增加的紅色熒光可知，U-2 OS細胞對磷脂誘導(dǎo)藥物的處理，導(dǎo)致溶酶體數(shù)目和體積的增加。細胞核的復(fù)染用Hoechst 33342染料（藍色）。

（A）未處理的細胞（B）氯丙嗪，28µM （C）維拉帕米，200 µM

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
ENZ-51015-KP002	Lyso-ID^® Red cytotoxicity kit (GFP-Certified^®) for microplates 溶酶體細胞毒理檢測試劑盒（紅色熒光）（綠色細胞系）（微孔板）	1 kit