瓊脂糖層析產(chǎn)品：從科研到生產(chǎn)的全方位解決方案

來源：作者：人氣：-發(fā)表時(shí)間：2024-11-19 16:35:00【大中小】

瓊脂糖層析是一種常用的生物分離技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域。它利用瓊脂糖凝膠的多孔性，根據(jù)分子大小、形狀等差異來分離生物大分子，如稀溶液的濃縮、不穩(wěn)定蛋白質(zhì)的純化、從純化的分子中除去殘余的污染物等。

瓊脂糖凝膠的特性

親水性強(qiáng)： 瓊脂糖凝膠具有良好的親水性，可以提供一個(gè)溫和的水相環(huán)境，避免蛋白質(zhì)變性。

多孔性： 瓊脂糖凝膠具有不同的孔徑大小，可以根據(jù)需要選擇合適的凝膠分離不同大小的分子。

化學(xué)穩(wěn)定性好： 瓊脂糖凝膠在多種pH和溫度下都比較穩(wěn)定，適合用于多種實(shí)驗(yàn)條件。

非特異性吸附低： 瓊脂糖凝膠對(duì)生物大分子的非特異性吸附較低，有利于提高分離純度。

瓊脂糖層析的類型

親和層析： 根據(jù)生物分子之間的特異性相互作用進(jìn)行分離，如抗原-抗體、酶-底物等。

離子交換層析： 根據(jù)分子表面電荷的差異進(jìn)行分離，利用離子交換劑與蛋白質(zhì)帶電基團(tuán)之間的靜電作用。

凝膠過濾層析： 根據(jù)分子大小分離，大分子先被洗脫下來，小分子后被洗脫下來。

瓊脂糖層析步驟

樣品處理：將待分離的樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，如裂解、離心等，以便于后續(xù)的層析操作。

上樣：將處理后的樣品小心地加入到凝膠的上樣孔中。

電泳：在一定的電壓下進(jìn)行電泳，使樣品中的不同組分根據(jù)其分子大小和電荷差異而分開。

染色和觀察：電泳結(jié)束后，可以通過染色（如使用溴化乙錠）來觀察和分析分離的結(jié)果。

瓊脂糖層析實(shí)驗(yàn)一、

小麥蒼白桿菌 5bvl 鉻酸鹽抗性決定子中轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 ChrB 的鑒定和表征

瓊脂糖層析實(shí)驗(yàn)二、

來自解纖維熱酸菌 11B 的嗜熱內(nèi)切葡聚糖酶 AcCel12B 的克隆、表達(dá)和表征.

瓊脂糖層析實(shí)驗(yàn)三、

人類 IgE 對(duì)曼氏血吸蟲原肌球蛋白不同剪接變體的反應(yīng)：與免疫的關(guān)聯(lián)

分類	層析介質(zhì)	介紹
親和層析填料	Mab A 親和層析介質(zhì)	Mab A作為新一代抗體純化介質(zhì)，采用改良的超剛性瓊脂糖凝膠基質(zhì)，并偶聯(lián)了高耐堿突變的Protein A。
	Mab A新一代抗體純化介質(zhì)	Mab A不僅以改良的高剛性瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，還偶聯(lián)了高耐堿Protein A。其特點(diǎn)在于高度交聯(lián)的瓊脂糖凝膠基質(zhì)。
	Protein A 4FF 親和介質(zhì)	Protein G是一種鏈球菌胞壁蛋白，能與IgG的Fc區(qū)域結(jié)合，且比Protein A具有更廣泛的結(jié)合能力，包括多克隆IgG及人IgG。其血清蛋白結(jié)合水平低，純度高，配基脫落少，還能與某些抗體的片段結(jié)合。
	Protein G 4FF 親和介質(zhì)	Protein G親和介質(zhì)適用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，通過一步親和層析即可獲得高純度抗體。
	Ni-IDA 6FF His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)	Ni親和層析介質(zhì)采用高流速瓊脂糖基質(zhì)，結(jié)合IDA、NTA、TED配基與Ni2+離子，因螯合方式差異，對(duì)不同蛋白純化具有選擇性，廣泛用于His標(biāo)簽蛋白純化。
	Ni-NTA His標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)
	Ni-TED 6FF His標(biāo)簽蛋白純化	Ni-TED FF介質(zhì)耐受EDTA和DTT，簡化清洗再生步驟，無需脫鎳，直接NaOH清洗。
	IMAC 6FF固定化金屬離子層析介質(zhì)	IMAC利用分子對(duì)金屬離子的親和性，通過蛋白質(zhì)側(cè)鏈與金屬離子相互作用實(shí)現(xiàn)分離純化，適用于提純蛋白質(zhì)和多肽，尤其是His標(biāo)記蛋白，金屬離子選擇多樣。
	Chelating FF
	GST 標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)	GST親和介質(zhì)專用于GST標(biāo)簽蛋白及其依賴蛋白的分離純化。
	Protein A/G Agarose	Protein A/G Agarose融合了Protein A和G的抗體結(jié)合域，具有廣泛的抗體結(jié)合能力和高親和力，適用于多種IgG亞型及其他免疫球蛋白的純化。該產(chǎn)品以高度交聯(lián)瓊脂糖為基質(zhì)，載量高，流速快，性能優(yōu)越。
	Benzamidine 4FF（HS）	Benzamidine 4FF是專為絲氨酸蛋白酶設(shè)計(jì)的親和層析介質(zhì)，以瓊脂糖為基質(zhì)，具有高化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性，能有效純化多種絲氨酸蛋白酶，具有流速快、非特異吸附低、分離效果佳的特點(diǎn)。
	MBP FF標(biāo)簽蛋純化介質(zhì)	MBP標(biāo)簽蛋白親和層析介質(zhì)能促進(jìn)融合蛋白的正確折疊，提高溶解性，尤其是真核蛋白，是兼具純化和促溶功能的唯一標(biāo)簽蛋白。
	Endotoxin Rem 4FFⅠ 內(nèi)毒素純化親和層析介質(zhì)	內(nèi)毒素是蛋白研究中的常見污染物，對(duì)人類有害，能引發(fā)多種不良癥狀，因此檢測和去除內(nèi)毒素至關(guān)重要。親和層析因高度選擇性成為去除內(nèi)毒素的理想方法。
	Endotoxin Rem 4FFⅡ 內(nèi)毒素純化親和層析介質(zhì)
	Streptactin 4FF 標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì)	Strep-Tag II是一個(gè)小標(biāo)簽，不影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，純化條件溫和，單步純化純度高，優(yōu)于His標(biāo)簽，且蛋白兩端均可融合，因此得到廣泛應(yīng)用。
	Streptactin HP 標(biāo)簽蛋白純化層析介質(zhì)
	Plasmid HP 質(zhì)粒純化層析介質(zhì)	嗜硫親和利用電子供受體間的作用力分離純化生物分子，作用力在高鹽環(huán)境下增強(qiáng)，低鹽環(huán)境下減弱。
	Virus 親和層析介質(zhì)	Virus親和層析介質(zhì)以超高剛性微球?yàn)榛\|(zhì)，偶聯(lián)硫酸葡聚糖，具有高流速、低反壓、高化學(xué)穩(wěn)定性，適用于病毒純化。
離子交換填料	強(qiáng)陰離子交換層析介質(zhì)	離子交換層析（IEX）是目前在生物分子分離純化中應(yīng)用最為廣泛的方法之一，依賴于正負(fù)電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質(zhì)和多少的差異來進(jìn)行分離。
	Q 40 強(qiáng)陰離子交換層析介質(zhì)
	SP/Q Big Beads	離子交換層析（IEX）是蛋白質(zhì)分離純化的常用方法，依據(jù)生物分子表面電荷差異進(jìn)行分離。瓊脂糖介質(zhì)具有高流速和高穩(wěn)定性，適用于重組蛋白、抗體等多種生物分子的濃縮粗純。
	DEAE 40 弱陰離子交換層析介質(zhì)
	DEAE 弱陰離子交換層析介質(zhì)
	強(qiáng)陽離子交換層析介質(zhì)
	DEAE A50 葡聚糖離子交換介質(zhì)	離子交換層析是目前在蛋白質(zhì)分離純化中應(yīng)用最廣泛的方法之一，是根據(jù)其表面電荷（類型、數(shù)量及分布）的差異分離不同生物分子的過程。
疏水層析填料	Phenyl 6FF 疏水層析介質(zhì)	疏水層析是利用蛋白質(zhì)在高鹽條件下吸附在疏水層析介質(zhì)的疏水基團(tuán)上，降低鹽濃度時(shí)，不同蛋白按疏水性從弱到強(qiáng)依次被洗脫，從而達(dá)到分離純化的目的。疏水層析操作條件溫和、分辨率高，是生物大分子分離純化最常用的方法之一。
	Octyl 4FF辛疏水層析介質(zhì)
	Butyl 4FF 疏水層析介質(zhì)
復(fù)合模式填料	Shell 700 復(fù)合模式層析介質(zhì)	由配基核心和惰性殼層組成；
	Shell 400 復(fù)合模式層析介質(zhì)	由配基核心和惰性殼層組成；
	AdMix Ⅰ40 復(fù)合模式強(qiáng)陰離子層析介質(zhì)	離子交換層析（IEX）是目前在生物分子分離純化中應(yīng)用最為廣泛的方法之一，依賴于正負(fù)電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質(zhì)和多少的差異來進(jìn)行分離。
	AdMix Ⅱ 40 復(fù)合模式強(qiáng)陰離子層析介質(zhì)	AdMix II介質(zhì)與目標(biāo)分子主要通過離子（強(qiáng)陰離子）、氫鍵和疏水作用交互。流穿模式下，抗體通過，雜質(zhì)如HCP、DNA被吸附。其復(fù)合離子配基提高了鹽耐受性，簡化了高鹽樣品處理。AdMix II疏水性弱，易清洗再生，無需有機(jī)相。經(jīng)100次清洗后，雜質(zhì)結(jié)合力仍達(dá)80%。
	CaSphere-CHT 1 羥基磷灰石層析介質(zhì)	以其獨(dú)特的選擇性、分辨率和分離蛋白質(zhì)的能力而聞名，是由鈣和磷酸鹽的化學(xué)結(jié)合形成的。CaSphere-CHT 1羥基磷灰石層析介質(zhì)是目前最具有特征的混合模式層析介質(zhì)之一，該產(chǎn)品兼具離子交換和金屬親和力，其配基和介質(zhì)骨架都是由同一種材料來源同時(shí)形成，為工藝開發(fā)提供了獨(dú)一無二的選擇性和分辨率，其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。
凝膠過濾填料	Sup-Dextran75 凝膠過濾層析介質(zhì)	Sup-Dextran75系列是一種制備級(jí)凝膠過濾層析介質(zhì)，含葡聚糖和瓊脂糖復(fù)合基質(zhì)。
	Sup-Dextran 150	Sup-Dextran 150系列是一種制備級(jí)凝膠過濾層析介質(zhì)，含葡聚糖和瓊脂糖復(fù)合基質(zhì)。該基質(zhì)結(jié) 合了交聯(lián)葡聚糖的優(yōu)異凝膠過濾層析特性和高度交聯(lián)瓊脂糖的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，從而可制備具有卓越選擇性和高分辨率的分離介質(zhì)，流速快且反壓低，此外，其低非特異性吸附可提高生物材料的回收率，此系列產(chǎn)品為單克隆抗體的分離、精純和產(chǎn)品配制提供了極高的分辨率。
	Sup-Dextran200 凝膠過濾層析介質(zhì)	Sup-Dextran 200系列是一種制備級(jí)凝膠過濾層析介質(zhì)，含葡聚糖和瓊脂糖復(fù)合基質(zhì)。

瓊脂糖層析的注意事項(xiàng)

膠、緩沖液的選擇，流速和樣品量的控制均對(duì)分離效果至關(guān)重要。需根據(jù)待分離分子的分子量選擇合適孔徑大小的凝膠，同時(shí)考慮緩沖液的pH和離子強(qiáng)度等因素；流速過快會(huì)影響分離效果，而流速過慢則延長分離時(shí)間；此外，樣品量過大可能導(dǎo)致柱子堵塞，同樣影響分離效果。

*部分內(nèi)容來自網(wǎng)路及論文

參考文獻(xiàn)：

1. Rita Branco, et al. Identification and characterization of the transcriptional regulator ChrB in the chromate resistance determinant of Ochrobactrum tritici 5bvl1. PLoS One. 2013 Nov 4;8(11):e77987.

2. Junling Wang, et al. Cloning, Expression, and Characterization of a Thermophilic Endoglucanase, AcCel12B from Acidothermus cellulolyticus 11B. Int J Mol Sci. 2015 Oct 22;16(10):25080-95.

3. Sukrit Silas, et al. Human IgE responses to different splice variants of Schistosoma mansoni tropomyosin: associations with immunity. Int J Parasitol. 2014 May;44(6):381-90.