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瓊脂糖層析產品：從科研到生產的全方位解決方案

來源：作者：人氣：-發表時間：2024-11-19 16:35:00【大中小】

瓊脂糖層析是一種常用的生物分離技術，廣泛應用于生物化學、分子生物學等領域。它利用瓊脂糖凝膠的多孔性，根據分子大小、形狀等差異來分離生物大分子，如稀溶液的濃縮、不穩定蛋白質的純化、從純化的分子中除去殘余的污染物等。

瓊脂糖凝膠的特性

親水性強： 瓊脂糖凝膠具有良好的親水性，可以提供一個溫和的水相環境，避免蛋白質變性。

多孔性： 瓊脂糖凝膠具有不同的孔徑大小，可以根據需要選擇合適的凝膠分離不同大小的分子。

化學穩定性好： 瓊脂糖凝膠在多種pH和溫度下都比較穩定，適合用于多種實驗條件。

非特異性吸附低： 瓊脂糖凝膠對生物大分子的非特異性吸附較低，有利于提高分離純度。

瓊脂糖層析的類型

親和層析： 根據生物分子之間的特異性相互作用進行分離，如抗原-抗體、酶-底物等。

離子交換層析： 根據分子表面電荷的差異進行分離，利用離子交換劑與蛋白質帶電基團之間的靜電作用。

凝膠過濾層析： 根據分子大小分離，大分子先被洗脫下來，小分子后被洗脫下來。

瓊脂糖層析步驟

樣品處理：將待分離的樣品進行適當的預處理，如裂解、離心等，以便于后續的層析操作。

上樣：將處理后的樣品小心地加入到凝膠的上樣孔中。

電泳：在一定的電壓下進行電泳，使樣品中的不同組分根據其分子大小和電荷差異而分開。

染色和觀察：電泳結束后，可以通過染色（如使用溴化乙錠）來觀察和分析分離的結果。

瓊脂糖層析實驗一、

小麥蒼白桿菌 5bvl 鉻酸鹽抗性決定子中轉錄調節因子 ChrB 的鑒定和表征

瓊脂糖層析實驗二、

來自解纖維熱酸菌 11B 的嗜熱內切葡聚糖酶 AcCel12B 的克隆、表達和表征.

瓊脂糖層析實驗三、

人類 IgE 對曼氏血吸蟲原肌球蛋白不同剪接變體的反應：與免疫的關聯

分類	層析介質	介紹
親和層析填料	Mab A 親和層析介質	Mab A作為新一代抗體純化介質，采用改良的超剛性瓊脂糖凝膠基質，并偶聯了高耐堿突變的Protein A。
	Mab A新一代抗體純化介質	Mab A不僅以改良的高剛性瓊脂糖凝膠為基質，還偶聯了高耐堿Protein A。其特點在于高度交聯的瓊脂糖凝膠基質。
	Protein A 4FF 親和介質	Protein G是一種鏈球菌胞壁蛋白，能與IgG的Fc區域結合，且比Protein A具有更廣泛的結合能力，包括多克隆IgG及人IgG。其血清蛋白結合水平低，純度高，配基脫落少，還能與某些抗體的片段結合。
	Protein G 4FF 親和介質	Protein G親和介質適用于抗體（單抗和多抗）的分離純化，通過一步親和層析即可獲得高純度抗體。
	Ni-IDA 6FF His標簽蛋白純化介質	Ni親和層析介質采用高流速瓊脂糖基質，結合IDA、NTA、TED配基與Ni2+離子，因螯合方式差異，對不同蛋白純化具有選擇性，廣泛用于His標簽蛋白純化。
	Ni-NTA His標簽蛋白純化介質
	Ni-TED 6FF His標簽蛋白純化	Ni-TED FF介質耐受EDTA和DTT，簡化清洗再生步驟，無需脫鎳，直接NaOH清洗。
	IMAC 6FF固定化金屬離子層析介質	IMAC利用分子對金屬離子的親和性，通過蛋白質側鏈與金屬離子相互作用實現分離純化，適用于提純蛋白質和多肽，尤其是His標記蛋白，金屬離子選擇多樣。
	Chelating FF
	GST 標簽蛋白純化介質	GST親和介質專用于GST標簽蛋白及其依賴蛋白的分離純化。
	Protein A/G Agarose	Protein A/G Agarose融合了Protein A和G的抗體結合域，具有廣泛的抗體結合能力和高親和力，適用于多種IgG亞型及其他免疫球蛋白的純化。該產品以高度交聯瓊脂糖為基質，載量高，流速快，性能優越。
	Benzamidine 4FF（HS）	Benzamidine 4FF是專為絲氨酸蛋白酶設計的親和層析介質，以瓊脂糖為基質，具有高化學穩定性和生物相容性，能有效純化多種絲氨酸蛋白酶，具有流速快、非特異吸附低、分離效果佳的特點。
	MBP FF標簽蛋純化介質	MBP標簽蛋白親和層析介質能促進融合蛋白的正確折疊，提高溶解性，尤其是真核蛋白，是兼具純化和促溶功能的唯一標簽蛋白。
	Endotoxin Rem 4FFⅠ 內毒素純化親和層析介質	內毒素是蛋白研究中的常見污染物，對人類有害，能引發多種不良癥狀，因此檢測和去除內毒素至關重要。親和層析因高度選擇性成為去除內毒素的理想方法。
	Endotoxin Rem 4FFⅡ 內毒素純化親和層析介質
	Streptactin 4FF 標簽蛋白純化介質	Strep-Tag II是一個小標簽，不影響蛋白質的結構和功能，純化條件溫和，單步純化純度高，優于His標簽，且蛋白兩端均可融合，因此得到廣泛應用。
	Streptactin HP 標簽蛋白純化層析介質
	Plasmid HP 質粒純化層析介質	嗜硫親和利用電子供受體間的作用力分離純化生物分子，作用力在高鹽環境下增強，低鹽環境下減弱。
	Virus 親和層析介質	Virus親和層析介質以超高剛性微球為基質，偶聯硫酸葡聚糖，具有高流速、低反壓、高化學穩定性，適用于病毒純化。
離子交換填料	強陰離子交換層析介質	離子交換層析（IEX）是目前在生物分子分離純化中應用最為廣泛的方法之一，依賴于正負電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質和多少的差異來進行分離。
	Q 40 強陰離子交換層析介質
	SP/Q Big Beads	離子交換層析（IEX）是蛋白質分離純化的常用方法，依據生物分子表面電荷差異進行分離。瓊脂糖介質具有高流速和高穩定性，適用于重組蛋白、抗體等多種生物分子的濃縮粗純。
	DEAE 40 弱陰離子交換層析介質
	DEAE 弱陰離子交換層析介質
	強陽離子交換層析介質
	DEAE A50 葡聚糖離子交換介質	離子交換層析是目前在蛋白質分離純化中應用最廣泛的方法之一，是根據其表面電荷（類型、數量及分布）的差異分離不同生物分子的過程。
疏水層析填料	Phenyl 6FF 疏水層析介質	疏水層析是利用蛋白質在高鹽條件下吸附在疏水層析介質的疏水基團上，降低鹽濃度時，不同蛋白按疏水性從弱到強依次被洗脫，從而達到分離純化的目的。疏水層析操作條件溫和、分辨率高，是生物大分子分離純化最常用的方法之一。
	Octyl 4FF辛疏水層析介質
	Butyl 4FF 疏水層析介質
復合模式填料	Shell 700 復合模式層析介質	由配基核心和惰性殼層組成；
	Shell 400 復合模式層析介質	由配基核心和惰性殼層組成；
	AdMix Ⅰ40 復合模式強陰離子層析介質	離子交換層析（IEX）是目前在生物分子分離純化中應用最為廣泛的方法之一，依賴于正負電荷間的相互作用，利用不同生物分子在特定條件下帶有電荷的性質和多少的差異來進行分離。
	AdMix Ⅱ 40 復合模式強陰離子層析介質	AdMix II介質與目標分子主要通過離子（強陰離子）、氫鍵和疏水作用交互。流穿模式下，抗體通過，雜質如HCP、DNA被吸附。其復合離子配基提高了鹽耐受性，簡化了高鹽樣品處理。AdMix II疏水性弱，易清洗再生，無需有機相。經100次清洗后，雜質結合力仍達80%。
	CaSphere-CHT 1 羥基磷灰石層析介質	以其獨特的選擇性、分辨率和分離蛋白質的能力而聞名，是由鈣和磷酸鹽的化學結合形成的。CaSphere-CHT 1羥基磷灰石層析介質是目前最具有特征的混合模式層析介質之一，該產品兼具離子交換和金屬親和力，其配基和介質骨架都是由同一種材料來源同時形成，為工藝開發提供了獨一無二的選擇性和分辨率，其高選擇性可以分離電泳或其他層析模式難以分離的蛋白。
凝膠過濾填料	Sup-Dextran75 凝膠過濾層析介質	Sup-Dextran75系列是一種制備級凝膠過濾層析介質，含葡聚糖和瓊脂糖復合基質。
	Sup-Dextran 150	Sup-Dextran 150系列是一種制備級凝膠過濾層析介質，含葡聚糖和瓊脂糖復合基質。該基質結合了交聯葡聚糖的優異凝膠過濾層析特性和高度交聯瓊脂糖的物理和化學穩定性，從而可制備具有卓越選擇性和高分辨率的分離介質，流速快且反壓低，此外，其低非特異性吸附可提高生物材料的回收率，此系列產品為單克隆抗體的分離、精純和產品配制提供了極高的分辨率。
	Sup-Dextran200 凝膠過濾層析介質	Sup-Dextran 200系列是一種制備級凝膠過濾層析介質，含葡聚糖和瓊脂糖復合基質。

瓊脂糖層析的注意事項

膠、緩沖液的選擇，流速和樣品量的控制均對分離效果至關重要。需根據待分離分子的分子量選擇合適孔徑大小的凝膠，同時考慮緩沖液的pH和離子強度等因素；流速過快會影響分離效果，而流速過慢則延長分離時間；此外，樣品量過大可能導致柱子堵塞，同樣影響分離效果。

*部分內容來自網路及論文

參考文獻：

1. Rita Branco, et al. Identification and characterization of the transcriptional regulator ChrB in the chromate resistance determinant of Ochrobactrum tritici 5bvl1. PLoS One. 2013 Nov 4;8(11):e77987.

2. Junling Wang, et al. Cloning, Expression, and Characterization of a Thermophilic Endoglucanase, AcCel12B from Acidothermus cellulolyticus 11B. Int J Mol Sci. 2015 Oct 22;16(10):25080-95.

3. Sukrit Silas, et al. Human IgE responses to different splice variants of Schistosoma mansoni tropomyosin: associations with immunity. Int J Parasitol. 2014 May;44(6):381-90.