蛋白酶K / Proteinase K

來(lái)源：seebio.cn作者：西寶生物人氣：-發(fā)表時(shí)間：2012-03-23 13:55:00【大中小】

蛋白酶K / Proteinase K

(Lyophilized Powder, from Tritirachium album limber)

簡(jiǎn)介
蛋白酶K是現(xiàn)有蛋白酶中活性高的品種，來(lái)源于林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）。蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。在pH 4～pH 12的條件下均有活性，在SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。它可切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生物樣品中蛋白質(zhì)的降解。蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定，具有降解天然蛋白質(zhì)的能力。

應(yīng)用
u 基因診斷試劑盒
u 基因組DNA提取試劑盒
u RNA提取試劑盒中去除DNA和RNA制備中的核酸酶
u 提取組織中非蛋白成份降解含有蛋白質(zhì)的雜質(zhì)-譬如DNA疫苗和肝素的制備
u 制備脈沖電泳的染色體DNA
u 蛋白質(zhì)印跡
u 蛋白酶K的一般工作濃度50-100ug/ml

質(zhì)量指標(biāo)

貨號(hào)	170290
品名	蛋白酶K / Proteinase K
來(lái)源	林伯氏白色念球菌（Tritirachium album limber）
外觀(guān)	白色凍干粉
比活	>40 U/mg蛋白。
分子量	29,730
CAS No.	39450-01-6
EC No	3.4.21.14
活性單位定義	37oC、pH 7.5條件下，每分鐘可水解底物酪蛋白生成1 μmol酪氨酸的蛋白酶K 的量，定義為一個(gè)單位（U）。
DNase殘留	以λ DNA為底物，37oC消化6小時(shí)以上，未檢測(cè)到脫氧核糖核酸酶活性。
RNase殘留	25oC消化16小時(shí)以上，未檢測(cè)到核糖核酸酶活性。
失活方法	反應(yīng)體系中加入PMSF或DFP抑制劑即可失活，65℃溫育10-15min可部分失活
包裝/價(jià)格	100mg/350元，1g，10g，詢(xún)價(jià) 現(xiàn)貨

儲(chǔ)存

干粉狀態(tài)可在0~4oC條件下低溫保藏。溶解后分裝為適當(dāng)體積，-20oC貯存。運(yùn)輸可在室溫下進(jìn)行。
正確的貯存條件下，干粉狀態(tài)的有效期可達(dá)一年。液體狀態(tài)在-20oC有效期為半年。打開(kāi)包裝使用后，如果在2~8oC環(huán)境下放置超過(guò)一周時(shí)間，建議過(guò)濾除菌或增加穩(wěn)定劑如0.5%疊氮化鈉，防止微生物污染。

貯存和稀釋緩沖液：50 mM Tris-HCL緩沖液,2mMCaCL2 (pH 8.0)。

反應(yīng)條件：反應(yīng)緩沖液中37-56℃溫育一小時(shí)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

1. 酶活測(cè)定和穩(wěn)定性試驗(yàn)

(1) 酶活測(cè)定

Specificity Activit of Proteinase K
Product Manufacture	國(guó)外M品牌	Seebio
Activty from lyophilized product u/mg	33.5	49.5

(2)純度和消化蛋白測(cè)試（SDS-PAGE）

結(jié)果: 蛋白質(zhì)純度超過(guò) 99% （激光掃描 SDS-PAGE膠）

(3) 穩(wěn)定性測(cè)試：

結(jié)論：凍干粉正確儲(chǔ)存一年內(nèi)活性不變；液體酶酶活半年內(nèi)降低小于5%。

2. 對(duì)比試驗(yàn)

以Roche蛋白酶K和seebio蛋白酶K對(duì)比。
對(duì)比反應(yīng)條件：roche蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶k65℃10m； Seebio 蛋白酶K55℃60m
以下結(jié)果QC符合要求。每管均為500ul全血。共3組對(duì)照。

實(shí)驗(yàn)條件	得率
ROCHE65℃10m	33ug	19.2ug	5ug
SEEBIO65℃10m	30ug	20ug	4.8ug
SEEBIO55℃60m	30.4ug	18.5ug	5.4ug

結(jié)論：SEEBIO 蛋白酶K與ROCHE蛋白酶k實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在65℃水浴10m后得率及跑膠圖效果基本相同。可替代使用。

全血提取DNA試劑盒電泳圖

日期：2010.06.09
凝膠濃度：0.7％瓊脂糖RNA膠
上樣量：1ug/孔
電泳條件：U=105V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）

全血提取DNA actin電泳圖

日期：2010.06.10
凝膠濃度：0.7％瓊脂糖DNA膠
上樣量：10ug/孔
電泳條件：U=95V T=15min
1. 090826-15（roche，65℃ 10m）
2.090826-15 （seebio，65℃ 10m）
3. 090826-15（seebio，55℃ 60m）
4.090826-17 （roche， 65℃10m）
5. 090526-17（seebio， 65℃10m）
6.090826-17 （seebio， 55℃60m）
7. 090826-20（roche， 65℃10m）
8.090826-20 （seebio， 65℃10m）
9. 090826-20（seebio， 55℃60m）
－：Negative control
＋：Positive Control

參考文獻(xiàn)

1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.